COMPOSIÇÕES E MÉTODOS PARA ATIVAÇÃO NÃO-DIRECIONADA DE GENES ENDÓGENOS

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Abstract

"COMPOSIÇÕES E MÉTODOS PARA ATIVAÇÃO NÃO-DIRECIONADA DE GENES ENDÓGENOS". A presente invenção é dirigida de forma geral à ativação da expressão de gene ou à produção de superexpressão de um gene por métodos de recombinação in situ. A invenção também é direcionada de forma geral aos métodos para a expressão de um gene endógeno em uma célula em níveis maiores do que aqueles normalmente encontrados na célula. Em uma modalidade da invenção, a expressão de um gene endógeno é ativada ou aumentada após integração na célula, por recombinação não-homóloga ou ilegítima, de uma seqüência reguladora que ativa a expressão do gene. Em outra modalidade, a expressão do gene endógeno pode ainda ser aumentada por co-integração de um ou mais marcadores amplificáveis, e selecionando-se cópias aumentadas de um ou mais marcadores amplificáveis localizados no vetor integrado. Em outra modalidade, a invenção é dirigida à ativação de genes endógenos por integração não direcionada de vetores de ativação não especializados, que são fornecidos pela invenção, no genoma de uma célula hospedeira. A invenção também fornece métodos para a identificação, ativação, isolamento, e/ou expressão de genes não descobertos por métodos atuais uma vez que nenhuma seqüência alvo é necessária para integração. A invenção também fornece métodos para isolamento de moléculas de ácido nucléico (particularmente moléculas de cDNA) que codificam diversas proteínas, incluindo proteínas transmembrana, e para o isolamento de células que expressam tais proteínas transmembrana, que podem ser proteínas transmembrana heterólogas. A invenção também é dirigida a genes isolados, produtos de gene, moléculas de ácido nucléico, e a composições que compreendem tais genes, produtos de gene e moléculas de ácido nucléico, e a vetores e células hospedeiras que compreendem tais genes e moléculas de ácido nucléico, que podem ser usados em diversas aplicações terapêuticas e diagnósticas. Dessa forma, pela presente invenção, genes endógenos, incluindo aqueles associados com doenças humanas e desenvolvimento, podem ser ativados e isolados sem conhecimento prévio do perfil da seqüência, estrutura, função, ou expressão dos genes.