MÉTODO DE CAPTURA POR SONDA PARA RECUPERAÇÃO DE VDJ DA CADEIA ALFA E BETA DE TCR POR RNA TRANSCRITO DE FORMA REVERSA BASEADO EM ÓLIGO-DT

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Abstract

MÉTODO DE CAPTURA POR SONDA PARA RECUPERAÇÃO DE VDJ DA CADEIA ALFA E BETA DE TCR POR RNA TRANSCRITO DE FORMA REVERSA BASEADO EM ÓLIGO-DT. Essa revelação se relaciona de forma geral a um método de amplificação de sequências VDJ da cadeia alfa de TCR e/ou sequências VDJ da cadeia beta de TCR por transcrição reversa de pelo menos uma primeira fita de cDNA por mRNA contendo pelo menos uma sequência-alvo usando um iniciador óligo-dT, usando uma mistura de iniciadores multiplex de iniciadores configurados para se ligar às sequências VDJ da cadeia alfa de TCR e/ou sequências VDJ da cadeia beta de TCR para amplificar o cDNA, usando captura por sonda para capturar amplicons VDJ de TCR-específicos e eluir amplicons não-VDJ de TCR-específicos, realização de uma rodada adicional de PCR para enriquecer ainda mais amplicons de VDJ da cadeia alfa de TCR e de VDJ da cadeia beta de TCR e sequenciamento dos amplicons resultantes usando sequenciamento de próxima geração.