MÉTODO E KIT PARA A CARACTERIZAÇÃO DA INDIVIDUALIDADE GENÉTICA HUMANA BASEADO NA AMPLIFICAÇÃO POR PCR MULTIPLEX DE MICROSSATÉLITES POLIMÓRFICOS

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Abstract

MÉTODO E KIT PARA A CARACTERIZAÇÃO DA INDIVIDUALIDADE GENÉTICA HUMANA BASEADO NA AMPLIFICAÇÃO POR PCR MULTIPLEX DE MICROSSATÉLITES POLIMÓRFICOS A presente invenção se refere a um método e kit para a determinação da individualidade genética humana, altamente útil em testes de paternidade, estudos criminalísticos, de evolução humana e de doenças genéticas, utilizando a amplificação por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) multiplex de microssatélites polimórficos. O método aperfeiçoado da presente invenção permite que através de uma única reação por PCR multiplex e uma única separação eletroforética, seguida de detecção fluorescente ou radioativa, ou coloração pela prata ou SYBR GreenI ou SYBR Gold seja possível amplificar e analisar um conjunto de pelo menos 10 microssatélites. Uma primeira concretização da presente invenção diz respeito a um método de caracterização da individualidade genética humana pela PCR multiplex, em uma única reação e com o uso de um único marcador ou mesmo na ausência de marcadores, utilizando iniciadores específicos construídos a partir de locos genéticos altamente polimórficos correspondentes aos microssatélites da presente invenção. Numa segunda concretização, a presente invenção diz respeito a um método de caracterização da individualidade humana pela PCR multiplex, em uma única reação e com o uso de marcadores diferentes para cada amostra de uma comparação, utilizando iniciadores específicos construídos a partir de locos genéticos altamente polimórficos correspondentes aos microssatélites da presente invenção. Numa terceira concretização, a invenção é dirigida para a produção de kits diagnósticos que utilizam o processo descrito acima. Um kit básico compreende todos os reagentes necessários para permitir a detecção da individualidade genética humana usando as técnicas de PCR multiplex que constitui a invenção acima, a saber: mistura de iniciadores, nucleotídeos e solução tampão apropriada para a amplificação por PCR. Opcionalmente, o kit pode conter a enzima Taq polimerase em quantidades suficientes para amplificação, solução de amostra para preparar o material amplificado para eletroforese, DNA genômico humano como controle, escadas alélicas, e um protocolo e manual para instruir o usuário. As quantidades dos vários reagentes dos kits podem variar de acordo com a aplicação específica.