MÉTODO E KIT PARA DETECÇÃO DE FATORES REUMATÓIDES EM LÍQUIDOS BIOLÓGICOS

IPC Classification

Abstract

"MÉTODO E KIT PARA DETECÇÃO DE FATORES REUMATÓIDES EM LÍQUIDOS BIOLÓGICOS". O fator reumatóide é detectado no soro, dentre outros métodos, usando-se partículas de látex recobertas com imunoglobulinas G (IgG) humanas, alteradas ou através do uso de hemácias de carneiro sensibilizadas com IgG de coelho anti-hemácia de carneiro, em dose sub-aglutinante. O fator reumatóide, que é um anticorpo dirigido contra a IgG humana, reconhece determinantes antigênicos na região Fc da IgG humana alterada e também reconhece epitopos ou determinantes antigênicos sobre a IgG de coelho. Assim, ambos os sistemas podem ser usados para a detecção de fatores reumatóides. O primeiro método é muito sensível e pouco específico, enquanto o segundo é altamente específico mas pouco sensível, além de necessitar de longos períodos de incubação. O método que origina o KIT associa a sensibilidade do primeiro com a especificidade do segundo. Isto foi possível pelas modificações introduzidas, tanto na etapa de desnaturação da IgG humana ou de coelho, quanto nas etapas de sensibilização do suporte sólido, como por exemplo o látex. No método que origina o KIT, as imunoglobulinas G são fortemente desnaturadas pelo calor (incubação de 50 a 65 C.) e por agentes químicos do grupo da uréia (nas concentrações que variam 2 a 8M) em presença de agentes redutores (da família do 2-mercaptoetanol em concentrações que variam de 0,01 a 2,5M), originando cadeias polipeptídicas monoméricas da IgG: as cadeias H+L. Estas cadeias desnaturadas e na forma agregadas ou não, são utilizadas para sensibilizar um suporte físico, o látex por exemplo, da seguinte forma: misturar cerca 1 volume de tampão do tipo borato (pH 5,5 a 9,5) contendo IgG desnaturada com cerca de 25 a 450 l de partículas de látex, e a seguir submeter a mistura a seguidos ciclos de incubação prolongada em diferentes temperaturas. Desta forma, a IgG desnaturada como descrito é adsorvida ao látex ou a outro suporte físico que adsorve proteínas, originando partículas sensibilizadas, que em presença de fator reumatóide sofrem aglutinação. O Kit originado pelo processo contém partículas sólidas (que como exemplo foi usado o látex) sensibilizado por IgG desnaturada segundo o método proposto. É também acompanhado de controles positivos e negativos. O Kit originado pelo método caracteriza um aperfeiçoamento em relação aos demais Kits pela sua alta sensibilidade e especificidade. A inovação apresentada pelo Kit está relacionada ao novo processo de desnaturação da IgG e às modificações nas etapas de sensibilização do suporte sólido, caracterizando um avanço metodológico.