PROCESSO DE OBTENÇÃO, COMPOSIÇÃO E USO DE UMA PROTEÍNA RECOMBINANTE PARA TRATAMENTO DE PATOLOGIAS COMO INFLAMAÇÃO E CÂNCER DEPENDENTES DE INTEGRINAS

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Abstract

PROCESSO DE OBTENÇÃO, COMPOSIÇÃO E USO DE UMA PROTEÍNA RECOMBINANTE PARA TRATAMENTO DE PATOLOGIAS COMO INFLAMAÇÃO E CÂNCER DEPENDENTES DE INTEGRINAS: Patente de invenção referente ao desenvolvimento de uma proteína recombinante que apresenta atividade anti-tumor. A presente invenção se caracteriza por apresentar, para tratamento de câncer e doenças angiogênese dependentes, uma nova desintegrina produzida através de técnicas de recombinação gênica. O cDNA foi amplificado utilizando-se da técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR). Os clones positivos provenientes da eletroporação foram selecionados e colocados para crescer em meio específico. Após obtenção de biomassa foram submetidos a processo de indução da expressão da proteína e aos tempos 0, 24, 36, 48, 60, 72 e 96 horas foram coletadas amostras do meio de fermentação. As amostras foram analisadas em eletroforese em gel de poliacrilamida e verificou-se a presença de uma banda de aproximadamente 11 kDa, massa esperada para o desintegrina clonada. A proteína foi purificada utilizando-se de protocolo envolvendo três etapas: 1) filtração tangencial com membrana de 5 kDa; 2) filtração em gel em coluna de Biogel P-30 e 3) cromatografia de troca iônica em coluna Q- sepharose. Testes in vivo, realizados com cobaias apresentando implante de diferentes tipos de tumor, mostraram que a desintegrina purificada, na dose diária de 150 g/kg de peso, é capaz de reduzir, em mais de 50%, o crescimento de tumor de Ehrlich ou melanoma implantados em camundongos.