CONSTRUÇÃO DE VETOR DE EXPRESSÃO DE PROTEÍNAS HETERÓLOGAS E DE UM BACULOVIRUS RECOMBINANTE BASEADO NO BACULOVIRUS NUCLEOPOLIEDROVÍRUS DE ANTICARSIA GEMMATALIS (AgMNPV) E SUA APLICAÇÃO COMO AGENTE DE CONTROLE BIOLÓGICO

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Abstract

"CONSTRUÇÃO DE VETOR DE EXPRESSÃO DE PROTEÍNAS HETERÓLOGAS E DE UM BACULOVIRUS RECOMBINANTE BASEADO NO BACULOVIRUS NUCLEOPOLIEDROVÍRUS DE ANTICARSIA GEMMATALIS (AGMNPV) E SUA APLICAÇÃO COMO AGENTE DE CONTROLE BIOLÓGICO". Nova variedade recombinante do nucleopoliedrovirus (AGMNPV) construída com recurso à modificação genética apresenta-se mais letal ao inseto hospedeiro, possuindo um gene (egt), inativo, não essencial ao vírus para sua multiplicação no inseto. O gene egt codifica uma enzima que tem a capacidade de transgerir resíduos de glicose ou galactose para o hormônio ecdisona, desse modo inibindo sua ação na muda do inseto. Um inseto infectado com o vírus alterado geneticamente com o gene egt inativo, conforme o vírus modificado segundo esta invenção, consome menos alimento do que outro inseto colonizado pelo vírus selvagem e, além disso, tem menor tempo de sobrevida. Durante a infecção de larvas com o vírus melhorado geneticamente, o hormônio ecdisona do inseto não é inativado, desta forma as lagartas mudam de estádio mais rapidamente do que as infectadas pelo vírus selvagem e o dano que causam às plantas atacadas é menor, pois alimentam-se menos. A invenção possibilita a construção de um vetor de transferência (pAgGal) contendo o gene -galactosidase sob controle dos promotores polihedrina (polh) AGMNPV e Escherichia coli gpt. O vetor de expressão, denominado pAgGAL, tem por finalidade a sua utilização na clonagem e expressão de genes heterólogos em células de insetor, por meio da construção de baculovírus AGMNPV recombinantes. Este vetor utiliza um sítio da enzima de restrição Bgl II logo após o promotor do gene da poliedrina do baculovírus AgMNPV para a clonagem dos genes heterólogos. O vetor possui uma região de aproximadamente 2000 pares de bases contendo parte do gene da poliedrina e regiões flanqueadoras acima e abaixo do gene.