DNA CODIFICANDO PARA UMA PROTEÍNA, CÉLULA, E, PROCESSO PARA PRODUZIR ISOMERASE DE FOSFATO DE HEXULOSE.

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Abstract

"DNA CODIFICANDO PARA UMA PROTEÍNA, CÉLULA, E, PROCESSO PARA PRODUZIR ISOMERASE DE FOSFATO DE HEXULOSE". A sintase de fosfato de hexulose foi purificado de Mycobacterium gastri para determinar uma seqüência de aminoácido da enzima. Os iniciadores de oligonucleotídeos a serem usados para PCR foram sintetizados em bases de informação da seqüência de aminoácido obtida. Um fragmento de DNA, que foi amplificado por realização do PCR por uso de um gabarito de DNA genômico preparado a partir de Mycobacterium gastri foi usado como uma sonda de modo que a hibridização da colônia foi realizada com relação a uma coleção compreendendo fragmentos obtidos por digestão de DNA genômico de Mycobacterium gastri com PstI para obter um clone positivo. Assim, o fragmento de DNA que contém ORF codificando sintase de fosfato de hexulose foi obtido. Além disso, o fragmento de DNA clonado continha outro ORF (ORF-2). O sistema de expressão de ORF-2 foi construído (pT- HPIS-1) e foi introduzido em célula de Escherichia coli . Após a indução da expressão de ORF-2, a atividade de sintase de fosfato de hexulose foi verificada no extrato de células abrigando pT-HPIS-1. Assim, o gene, que codificou para sintase de fosfato de hexulose, foi obtido junto com ORF que codificou para sintase de fosfato de hexulose.