USO DE PELO MENOS UMA MOLÉCULA-GUIA DE RNA E UMA PROTEÍNA CAS, MÉTODO DE LIGAÇÃO, CLIVAGEM, MARCAÇÃO OU MODIFICAÇÃO DE UM POLINUCLEOTÍDEO ALVO DE FITA DUPLA, CÉLULA PROCARIÓTICA TRANSFORMADA, E, COMPLEXO DE NUCLEOPROTEÍNA

IPC Classification

Priority claims

Abstract

Nucleases Cas9 termoestáveis. A presente invenção refere-se ao campo de engenharia genética e, mais particularmente, à edição de ácido nucleico e modificação do genoma. A presente invenção fornece uma proteína Cas isolada ou fragmento de polipeptídeo da mesma tendo uma sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 ou uma sequência de pelo menos 77% de identidade com a mesma. A proteína Cas ou polipeptídeo é capaz de ligação, clivagem, marcação ou modificação de um polinucleotídeo alvo de fita dupla a uma temperatura na faixa de 20°C e 100°C, inclusive. A invenção fornece adicionalmente moléculas de ácido nucleico isoladas codificando referidas nucleases Cas9, vetores de expressão e células hospedeiras. A invenção também fornece sequências PAM reconhecidas pela proteína Cas ou polipeptídeo. As nucleases Cas9 descritas aqui fornecem novas ferramentas para engenharia genética em geral, em particular em temperaturas elevadas e são de valor particular na manipulação genética de organismos termofílicos; particularmente microrganismos.