USO IN VITRO DE UMA COMBINAÇÃO DE UM DNA DE MINICÍRCULO E DE UM DNA CODIFICANDO UM ELEMENTO TRANSPONÍVEL, MÉTODO IN VITRO PARA OBTENÇÃO DE UMA CÉLULA MAMÍFERA RECOMBINANTE E COMPOSIÇÃO

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Priority claims

Abstract

O método descrito aqui descreve uma nova tecnologia oferecendo eficiência não paralela, flexibilidade, utilidade e velocidade para integração estável de transgenes em linfócitos e outras células mamíferas. O novo método é baseado no uso de uma transposase codificada por mRNA (por exemplo, Sleeping Beauty transposase) em combinação com um elemento transponível codificado por DNA de minicírculo. O novo método permite taxas de transferência de gene maiores e é ao mesmo tempo menos tóxico do que o método convencional, que é o uso de transposase codificada por DNA de plasmídeo em combinação com um elemento transponível codificado por DNA de plasmídeo. As aplicações da invenção incluem, porém não estão limitadas à integração estável de um transgene codificando um receptor imune (por exemplo, um receptor de célula T ou um receptor de antígeno quimérico sintético) em linfócitos T humanos, com o receptor imune conferindo especificidade para uma molécula expressa por uma célula de tumor. O mRNA de transposase e DNA de minicírculo de transpóson podem ser introduzidos em linfócitos por métodos incluindo, porém não limitados à eletrotransferência tal como eletroporação e nucleofecção.