EXPRESSÃO RECOMBINANTE DE PROTEÍNAS EM UMA FORMA DE DUAS CADEIAS LIGADAS POR DISSULFETO

Classificação IPC

Prioridades unionistas

Resumo técnico

EXPRESSAO RECOMBINANTE DE PROTEÍNAS EM UMA FORMA DE DUAS CADEIAS LIGADAS POR DISSULFETO. A invenção se relaciona a um método para produzir polipeptideos ou proteínas em uma forma de duas cadeias por expressão recombinante em células hospedeiras de E. coli, em que i) o polipeptideo ou proteína exerce sua atividade biológica como um polipeptideo ou proteína de duas cadeias, ii) o grupo de aminoácido C-terminal da primeira cadeia é um grupo Arg ou Lys, iii) a segunda cadeia da proteina/polipeptideo, em sua extremidade N-terminal, tem 1 até 20 grupos de aminoácidos e uma seqUência pentapeptídica VPXGS referida como PRS, em que X pode ser qualquer aminoácido que ocorre naturalmente, em que V representa Val, Leu, Ile, Ala, Phe, Pro ou Gly, P representa Pro, Leu, Ile, Ala, Phe, Val ou Gly, O representa Gly, Leu, Ile, Ala, Pro, Phe ou Val e 5 representa Ser, Tyr, Trp ou Thr; e (iv) o método compreende as seguintes etapas: a) modificar o polipeptídeo ou proteína no nível de ácido nucléico de tal maneira que o polipeptideo ou proteína na sua forma modificada compreende a seqUência VPXGS em sua área de alça, com X, V, P. O e 5 definidos como acima; b) introduzir a construção modificada no nível de ácido nucléico em células de E. coli; c) cultivo e então lise das células hospedeiras; e d) isolar o polipeptideo ou proteína de duas cadeias. De acordo com uma modalidade preferida da invenção, o polipeptídeo ou proteína é uma neurotoxina botulínica, especialmente a neurotoxina botulínica (BoNT(A)) tipo A.