PROCESSO PARA A MODIFICAÇÃO GENÉTICA DE UMA PLANTA

Classificação IPC

Prioridades unionistas

Resumo técnico

"PRODUÇÃO DE UM MUTANTE DE INSERÇÃO DE SUT4 (ARABIDOPSIS THALIANA)". Sementes de 12.800 plantas de Arabidopsis, mutagenizadas com T-DNA, (correspondem a 19.200 operações de inserção) foram obtidas da Dupont Co. e do Arabidopsis Biological Resource Center (ABRC), Ohio State University. As plantas foram testadas em grupos de 100. As plantas foram deixadas crescer em cultura estéril e o DNA genômico foi isolado. O DNA proveniente dos 140 grupos, cada um com 100 plantas, foi reunido em 14 super grupos (super pool) e o screening foi realizado de acordo com o método de Krysan et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. EUA (1996) 93, 8145-8150), sendo que foram utilizados prímers específicos de gene e prímers específicos de T-DNA. Um PCR foi realizado com utilizando os super grupos de DNA como molde, com um prímer específico para T-DNA (LB, região da extremidade esquerda da SEQ ID No. 9), e com um prímer específico de gene (AtSUT4r2 SEQ ID No. 10). Os produtos PCR foram separados por meio de eletroforese em gel de agarose e transferidos para uma membrana de náilon carregada. A membrana foi hibridizada com um produto de PCR de 2,46 kb de comprimento, preparado a partir de DNA genômico de WS (Wassilewskija ) como molde e dos prímers AtSUT4r2 (ver acima) e AtSUT4f2 (ATGGCTACTTCCGATCAAGATCGCCGTC SEQ ID No.11). Esta sonda foi marcada COM ^ 32^P-CTP.