PERSONALIZAÇÃO DE MONTAGEM COMBINATÓRIA DE MÚLTIPLOS LOCAIS

IPC Classification

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Abstract

MÃTODOS DE PRODUÃÃO DE UMA PLURALIDA-DE DE POLINUCLEOTÃDEOS MODIFICADOS". A presente invenção refere-se a um método inédito de produção de uma pluralidade de polinucleotídeos modificados dotados de diferentes combinações de várias mutações em múltiplos sítios através da personalização da montagem combinatória de múltiplos locais, compreendendo adicionar ao menos dois ou ao menos três iniciadores a um polinucleotídeo de molde com dois filamentos em uma única mistura da reação, em que os iniciadores não se sobrepõem, e em que cada um dos iniciadores compreende ao menos uma mutação diferente dos outros iniciadores, em que ao menos um iniciador é um iniciador dianteiro que pode parear a um filamento negativo do molde e ao menos um iniciador é um iniciador reverso que pode parear a um filamento positivo do molde, e submeter a mistura da reação a uma reação de extensão de polimerase para produzir uma pluralidade de polinucleotídeos modificados estendidos a partir dos ao menos três iniciadores. O método pode ser executado sem empregar uma etapa de ligação antes de transformar os polinucleotídeos modificados estendidos em uma célula. A pluralidade de polinucleotídeos modificados estendidos pode ser tratada com uma enzima para destruir o polinucleotídeo do molde antes de se transformar na célula.