PROCESSO MICROBIOLÓGICO DE CULTIVO PARA OBTENÇÃO DE PROLACTINA HUMANA

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Abstract

PROCESSO MICROBIOLÓGICO DE CULTIVO PARA OBTENÇÃO DE PROLACTINA HUMANA. É descrito o processo de cultivo em biorreator com curta duração para obtenção de altas biomassas da bactéria Escherichia coli e com eficiente secreção de prolactina humana no espaço periplásmico bacteriano. Foi utilizada uma cepa de Escherichia coli transformada pela inserção de um plasmídeo denominado PL-DsbA-hPRL. Esse plasmídeo é caracterizado por possuir o gene correspondente ao peptídeo sinalizador bacteriano DsbA seguido pelo cDNA da prolactina humana; o gene responsável pela resistência ao antibiótico ampicilina e o promotor Lambda PL cuja ativação ocorre por aumento de temperatura. Neste processo não foi utilizado o repressor clts, uma proteína termo-sensível que usualmente é utilizada para inibir o funcionamento do promotor Lambda PL durante crescimento a 30°. O processo de cultivo apresenta basicamente três etapas: na primeira etapa o crescimento é realizado sem adição contínua de nutrientes (cultivo "batch"), na segunda etapa ocorre adição contínua de nutrientes e carbohidrato (cultivo "fed-batch") e na útima etapa é realizada a ativação, caracterizada pelo aumento da temperatura mantendo-se a adição de nutrientes e carbohidrato. Esse processo de fermentação é de curta duração, em média 20 horas, com biomassa final correspondente à densidade óptica de aproximadamente 40 A600nm (unidades ópticas de absorbância em 600nm) e com expressão da ordem de 1 g de hPRL/mL/A600. É descrito também um processo alternativo de cultivo exclusivamente em "batch", com duração de apenas 10 horas e com rendimentos úteis da ordem de 12 g de hPRL/mL de meio de cultura.