MÉTODOS PARA EFETUAR A EVOLUÇÃO SELETIVA DE PROTÉINAS IN VITRO

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Abstract

MÉTODOS PARA EFETUAR A EVOLUÇÃO SELETIVA DE PROTEÍNAS IN VITRO. A presente invenção refere-se a produção de variantes de uma proteína em um método de evolução in vitro, compreendendo as etapas: (A) provisão de um sistema de expressão in vitro compreendendo (i) uma sequência de ácido nucléico S que codifica para uma proteína Y a ser variada,(ii) uma molécula alvo X que é capaz de se ligar à proteína Y, e/ou pelo menos uma variante Y' desta, (iii) uma polimerase de RNA (Pol) que é capaz de transcrever a seqúência de ácido nucléico S, (iv) uma transcriptase reversa (RT) que é capaz de transcrição reversa de transcritos da seqúência de áci- do nucléico S, onde ou a molécula alvo X é acoplada a Pol e a proteína Y é acoplada a RT, ou a molécula alvo X é acoplada a RT e a proteína Y é acopIada a FoI, (B) incubação do sistema de expressão in vítro de (A) sob condições que capacitam transcrição, transcrição reversa e transíação para formar variantes Y' da proteína Y e seqúências de ácido nucléico S' que codificam para estas, e que favorecem a formação de variantes Y' com propriedades de ligação aperfeiçoadas para a molécula alvo X, (O) isolamento e, onde apropriado, caracterização daquelas variantes Y' que exibem propriedades de ligação aperfeiçoadas para ligação a X, e/ou isolamento das variantes S' de seqúência de ácido nucléico que codificam para Y'.