EXPRESSÃO DE GENE MÚLTIPLA INCLUINDO CONSTRUCTOS SORF E MÉTODOS COM POLIPROTEÍNAS, PRO-PROTEÍNAS E PROTEÓLISE

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Abstract

EXPRESSÃO DE GENE MÚLTIPLA INCLUINDO CONSTRUCTOS SORF E MÉTODOS COM POLIPROTEINAS, PRO-PROTEINAS E PROTEÓLISE. São revelados constructos e métodos úteis para a expressão de proteínas usando produtos de tradução primários que são processados numa célula hospedeira recombinante. Constructos compreendendo uma única estrutura de leitura aberta (sORF') são descritos para a expressão de proteína, incluindo a expressão de múltiplos polipeptideos. Um produto de tradução primário (uma pro-proteina ou poliproteina) contém polipeptídeos tais como inteinas ou domínios auto-processadores da família do porco-espinho, ou variantes seus, inseridos na estrutura entre múltiplas subunídades de proteína de interesse. O produto primário também pode conter seqüências de clivagem tais como outros sítios de reconhecimento de protease ou de clivagem proteolítica, ou peptídeos de sinal os quais contêm seqüências de reconhecimento para peptidases de sinalização, separando pelo menos duas das subunídades de proteína múltiplas. As seqüências dos polipeptídeos auto-processadores ou dos sítios de clivagem inseridos podem ser manipuladas para aumentar a eficiência da expressão das subunidades de proteína múltipla separadas. Também revelados são os aspectos independentes de conduzir a expressão, secreção e/ou construção multímérica eficiente das proteínas, tais como imunoglobulinas. Onde a poliproteina contém segmentos de cadeia pesada e leve de imunoglobulina ou fragmentos capazes do reconhecimento de antígeno, numa modalidade uma proporção estequlométrica selecionável é de pelo menos duas cópias de um segmento de cadeia leve por segmento de cadeia pesada, com o resultado de que a produção de anticorpo funcional propriamente dobrado e construído é feita. Peptideos de sinal modificados, incluindo tais das cadeias leves de imunoglobulina, são descritos.