VETOR , CÉLULA HOSPEDEIRA, KIT, COMPOSIÇÃO DOS SUPLEMENTOS DE CULTURA CELULAR, E, MÉTODOS PARA SELECIONAR CÉLULAS QUE POSSAM SOBREVIVER EM MEIO SEM COLESTEROL, PARA SE OBTER CÉLULAS QUE TENHAM A CAPACIDADE DE SOBREVIVER EM UM MEIO DESPROVIDO DE COLESTEROL E PRODUZIR UMA PROTEÍNA HETERÓLOGA, E PARA EXPRESSAR UMA PROTEÍNA HETERÓLOGA

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Abstract

VETOR, CÉLULA HOSPEDEIRA, KIT, COMPOSIÇÃO DOS SUPLEMENTOS DE CULTURA CELULAR, E, MÉTODOS PARA SELECIONAR CÉLULAS QUE POSSAM SOBREVIVER EM MEIO SEM COLESTEROL, PARA SE OBTER CÉLULAS QUE TENHAM A CAPACIDADE DE SOBREVIVER EM UM MEIO DESPROVIDO DE COLESTEROL E PRODUZIR UMA PROTEÍNA HETERÓLOGA, E PARA EXPRESSAR UMA PROTEÍNA HETERÓLOGA. A presente invenção diz respeito a novos vetores marcadores de seleção, e a métodos para usar estes vetores para gerar sistemas estáveis de expressão de genes nas células eucarióticas. Mais especificamente, a presente invenção fornece composições e métodos que utilizam qualquer enzima útil na via biossintética eucariótica de esterol/colesterol, tal como uma 3- cetosteróide redutase, como um marcador de seleção metabólica para selecionar células transfectadas. Em uma forma de realização, o método compreende transfectar células que sejam auxotróficas quanto ao colesterol com um vetor codificando a 3-cetosteróide redutase e pelo menos uma proteína heteróloga, e selecionar células que tenham a capacidade de sobreviver em meio carente de colesterol e/ou de produzir a proteína heteróloga nestas células em meios quimicamente definidos e/ou livres de soro.