PROCESSO MICROBIOLÓGICO PARA OBTENÇÃO DE PLASMÍDEOS BACTERIANOS (VETORES OU CASSETES DE EXPRESSÃO) UTILIZANDO VETOR ABERTO COM PROMOTOR TERMO-SENSÍVEL DERIVADO DO FAGO LAMBDA E SUA APLICAÇÃO NA OBTENÇÃO DE ALTOS NÍVEIS DE SECREÇÃO DE PROTEÍNAS NO ESPAÇO PERIPLÁSMICO OU NO CITOPLASMA DE BACTÉRIAS

IPC Classification

Abstract

"PROCESSO MICROBIOLÓGICO PARA OBTENÇÃO DE PLASMÍDEOS BACTERIANOS (VETORES OU CASSETES DE EXPRESSÃO) UTILIZANDO VETOR ABERTO COM PROMOTOR TERMO-SENSÍVEL DERIVADO DO FAGO LAMBDA E SUA APLICAÇÃO NA OBTENÇÃO DE ALTOS NÍVEIS DE SECREÇÃO DE PROTEÍNAS NO ESPAÇO PERIPLÁSMICO OU NO CITOPLASMA DE BACTÉRIAS". A patente refere-se ao processo microbiológico para obtenção de um plasmídeo bacteriano aberto, altamente eficiente, usado como cassete de expressão ('cassette expression vector'), possibilitando obter outros vetores, com características mais específicas como: resistência contra antibióticos e secreção da proteína recombinante para o periplasma ou citoplasma bacteriano, condição essa definida pela presença ou não da seqüência sinalizadora, respectivamente. O processo inclue a linearização e defosforilação do cassete de expressão após introdução dos sítios de restrição Ndel e Bam HI e de uma seqüência espaçadora específica particularmente eficaz, assim como a introdução de diferentes seqüências sinalizadoras para uso em bactérias. O promotor é o Lambda P~ L~ (Bernard, H.; Helinski, D.R., Methods Enzymol. 1979, 955:229-236), cuja ativação ocorre por aumento de temperatura. Uma das aplicações desse cassete de expressão é a obtenção de plasmídeos para secreção do hormônio de crescimento humano e prolactina humana, confirmando a eficiência desse sistema para expressão de proteínas heterólogas em bactérias.