OLIGONUCLEOTÍDEOS, USO E MÉTODO PARA A TIPAGEM, DETERMINAÇÃO DA DOMINÂNCIA VIRAL E QUANTIFICAÇÃO RELATIVA DO PAPILOMAVÍRUS HUMANO QUE UTILIZA UMA COMBINÇÃO DE TÉCNICAS MOLECULARES, OLIGONUCLEOTÍDEOS E COMPOSTOS

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Abstract

"OLIGONUCLEOTÍDEOS, USO E MÉTODO PARA A TIPAGEM, DETERMINAÇÃO DA DOMINÂNCIA VIRAL E QUANTIFICAÇÃO RELATIVA DO PAPILOMAVÍRUS HUMANO QUE UTILIZA UMA COMBINAÇÃO DE TÉCNICAS MOLECULARES, OLIGONUCLEOTÍDEOS E COMPOSTOS". A presente invenção refere-se ao uso combinado das técnicas de biologia molecular, especificamente a tecnologia PCR Nested Multiplex (Reação em Cadeia da Polimerase duplicada) com oligonucleotídeos gerais consensuais seguidos por múltiplos pares de oligonucleotídeos específicos e componentes (reagentes e condições de reação) para tipar os papilomavírus humanos em amostras biológicas originárias de tecidos humanos, tais como swab cervical, raspado peniano, swab bucal, entre outros. Inicialmente esta invenção, amplifica pelo menos 65 tipos de HPV de forma geral, em seguida específica 32 tipos (Seq. ID Números 1 a 70) que potencialmente podem estar infectando amostras de tecidos humanos. Os procedimentos incluem a determinação de infecções múltiplas combinada com a obtenção da relação da carga viral entre os tipos de HPV, também chamada de dominância viral em um determinado estágio de infecção. São descritos 32 tipos virais que fazem parte de um kit de PCR multiplex para detecção e tipagem simultânea do vírus, cujas seqüências dos primers (iniciadores específicos ou oligonucleotídeos) gerais de consenso degenerados (1 reação de PCR) e combinados, bem como os primers específicos combinados (2 reação de PCR - nested) para os tipos virais, que englobam não-oncogênicos, oncogênicos e indeterminados são; 6, 11, 16, 18, 26, 30, 31, 33, 34, 35, 39, 40, 42, 44, 45, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 61, 62, 64, 66, 67, 68, 70, MM7, MM8 e MM9. A quantificação relativa entre os tipos virais em infecções múltiplas com séries de diluições de DNA molde, após a amplificação geral inicial (1 PCR) é determinada, evidenciando a dominância viral durante o acompanhamento clínico dos pacientes. A finalidade das diluições prévias a amplificação é obter um perfil de bandas dos tipos virais infectantes, permitindo a determinação da proporção relativa entre os espécimes de HPV presentes na amostra testada, bem como suas variações durante o progresso da infecção.