MÉTODO PARA A AMPLIFICAÇÃO COM BASE EM TRANSCRIÇÃO DE UMA SEQÜÊNCIA DE ÁCIDO NUCLÉICO DO HBV DE FILAMENTO DUPLO ALVO PARTINDO DO DNA DO HBV OPCIONALMENTE PRESENTE EM UMA AMOSTRA, OLIGONUCLEOTÍDEO, E, CONJUNTO DE TESTE ADEQUADO PARA REALIZAR A AMPLIFICAÇÃO E DETECÇÃO COM BASE EM TRANSCRIÇÃO DE DNA DO HBV

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Abstract

"MÉTODO PARA A AMPLIFICAÇÃO COM BASE EM TRANSCRIÇÃO DE UMA SEQÜÊNCIA DE ÁCIDO NUCLÉICO DO HBV ALVO PARTINDO DO DNA DO HBV OPCIONALMENTE PRESENTE EM UMA AMOSTRA, OLIGONUCLEOTÍDEO, CONJUNTO DE INICIADORES DE OLIGONUCLEOTÍDEO ADEQUADOS PARA O USO NA AMPLIFICAÇÃO DE ÁCIDO NUCLÉICO DO HBV, E, CONJUNTO DE TESTE ADEQUADO PARA REALIZAR A AMPLIFICAÇÃO E DETECÇÃO COM BASE EM TRANSCRIÇÃO DE DNA DO HBV". A presente invenção fornece um método para uma amplificação com base em transcrição de uma seqüência de ácido nucléico de HBV alvo partindo do DNA de HBV opcionalmente presente em uma amostra, que compreende as etapas de, - incubar a amostra suspeita de conter HBV, em um tampão de amplificação com uma ou mais enzimas de restrição capazes de clivar o DNA do HBV em um sítio de restrição selecionado, a dita enzima de restrição criando uma extremidade 3 definida do(s) dito(s) filamento(s) de DNA do HBV, um iniciador promotor, o dito iniciador promotor tendo uma região 5 que compreende a seqüência de um promotor reconhecido por uma RNA polimerase dependente de DNA e uma região 3 complementar à extremidade 3 definida do filamento de DNA, um iniciador segundo ou reverso, tendo a polaridade oposta do iniciador promotor e que compreende a extremidade 5 da dita seqüência alvo, e no caso de ssDNA do HBV como a seqüência alvo, um iniciador de restrição, - manter a mistura de reação assim criada sob as condições apropriadas durante uma quantidade suficiente de tempo para que uma digestão pela enzima de restrição ocorra, submeter a amostra assim obtida a um tratamento térmico a uma temperatura e tempo suficientes para inativar a enzima de restrição e/ou para tornar pelo menos parcialmente um filamento duplo em filamento único, - adicionar os seguintes reagentes à amostra: uma enzima tendo atividade de DNA polimerase dependente de RNA, uma enzima tendo atividade de DNA polimerase dependente de DNA, uma enzima tendo atividade de Rnase H, uma enzima tendo atividade de RNA polimerase e - manter a mistura de reação assim criada sob as condições apropriadas durante uma quantidade suficiente de tempo para que a amplificação ocorra.