PROCESSO PARA OBTENÇÃO DE ALTOS NÍVEIS DE EXPRESSÃO DO HORMÔNIO ESTIMULADOR DE TIREÓIDE (TIREOTROFINA HUMANA OU HTSH) EM CÉLULAS DE OVÁRIO DE HAMSTER CHINÊS, MEDIANTE A UTILIZAÇÃO DE VETORES DE EXPRESSÃO DICISTRÔNICOS, APLICAÇÃO DE UMA ESTRATÉGIA DE AMPLIFICAÇÃO COM DUPLO MARCADOR GÊNICO DETECÇÃO E CONTROLE DE QUALIDADE DO MESMO HTSH AO LONGO DO PROCESSO DE PRODUÇÃO MEDIANTE CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA EFICIÊNCIA EM FASE REVERSA

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Abstract

"PROCESSO PARA OBTENÇÃO DE ALTOS NÍVEIS DE EXPRESSÃO DO HORMÔNIO ESTIMULADOR DE TIREÓIDE (TIREOTROFINA HUMANA OU HTSH) EM CÉLULAS DE OVÁRIO DE HAMSTER CHINÊS, MEDIANTE A UTILIZAÇÃO DE VETORES DE EXPRESSÃO DICISTRÔNICOS, APLICAÇÃO DE UMA ESTRATÉGIA DE AMPLIFICAÇÃO COM DUPLO MARCADOR GÊNICO DETECÇÃO E CONTROLE DE QUALIDADE DO MESMO HTSH AO LONGO DO PROCESSO DE PRODUÇÃO MEDIANTE CROMOTOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA EFICIÊNCIA EM FASE REVERSA". Processo que utiliza células de ovário de hamster chinês (CHO), é baseado na utilização de vetores de expressão dicistrônicos para as subunidades e do hTSH e dos marcadores gênicos amplificáveis da diidrofolato redutase (DHFR) e da adenosina deaminase (ADA). Foram isolados os genes que codificam as subunidades e desta glicoproteína heterodimérica e construídos os respectivos vetores de expressão (pEDdc- e pEAdc- hTSH). A seguir, células CHO deficientes em DHFR (DBFR^ -^) foram cotransfectadas com estes vetores e cultivadas em meio seletivo. Os clones isolados foram submetidos à amplificação gênica sequencial em meio contendo concentrações crescentes de metotrexato (MTX) e de deoxicoformicina (dCF). Com a utilização de apenas MTX foram obtidos níveis de secreção de 7,2 1,3 g hTSH/10^ 6^ células/dia. Estes níveis foram ainda incrementados após a utilização do marcador ADA, mediante tratamento com dCF, alcançando níveis de 17,8 7,6 g hTSH/10^ 6^ células/dia. Portanto, a obtenção de altos rendimentos proteicos deveu-se principalmente à estratégia original de amplificação utilizando duplo marcador gênico.