MÉTODO DE REMOÇÃO DE RESÍDUOS DE ALANINA N-TERMINAL DE POLIPEPTÍDEOS COM AMINOPEPTIDASE DE AEROMONAS

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Abstract

"MÉTODO DE REMOÇÃO DE RESÍDUOS DE ALANINA N-TERMINAL DE POLIPEPTÍDEOS COM AMINOPEPTIDASE DE AEROMONAS". Esta invenção refere-se a um método de remoção de resíduos de alanina de terminal N de polipeptídeos, preferivelmente proteínas recombinantes, empregando uma aminopeptidase derivada da bactéria marinha Aeromonas proteolítica. Desta maneira, aminopeptidase de Aeromonas (AAP; E.C.3.4.11.10) pode ser empregada para remover resíduos de alanila de terminal N a partir de derivados de somatotropina humana (hST, hormônio de desenvolvimento humano, ou hGH), somatotropina porcina (pST), somatotropina bovina (bST), por exemplo, para produzir proteínas tendo sua seqüência de aminoácidos nativa. As reações de enzima podem ser realizadas em solução livre, ou a AAP pode ser imobilizada sobre um suporte sólido, para reações realizadas in vitro. Um método eficiente para converter Ala - hGH para hGH, por exemplo, compreende expressão de Ala - hGH em E. coli, recuperação dos corpos de inclusão, solubilização e reduplicação em detergente, remoção de detergente por ultrafiltração, preciptação seletiva, clivagem de enzima, seguida duas etapas de cromatografia de coluna.