MÉTODO PARA DIAGNÓSTICO DA LINFADENITE CASEOSA EM CAPRINOS UTILIZANDO A ASSOCIAÇÃO DOS ANTÍGENOS RCP01850 E RCP40 DE CORYNEBACTERIUM PSEUDOTUBERCULOSIS

IPC Classification

Abstract

Método para diagnóstico da linfadenite caseosa em caprinos utilizando a associação dos antígenos rCP01850 e rCP40 de Corynebacterium pseudotuberculosis. O presente invento trata-se de um método de diagnóstico sorológico para linfadenite caseosa (LC) em caprinos utilizando a associação das proteínas recombinantes rCP01850 (SEQ ID N°1) e rCP40 (SEQ ID N°2) que permite a detecção de anticorpos anti-C. pseudotuberculosis. Este método de ELISA indireto consiste na aplicação das seguintes etapas: sensibilização de placa de 96 poços com os antígenos rCP01850 e rCP40 (proporção 1:1) na concentração de 2µg/mL, seguido de bloqueio utilizando PBS-T mais leite em pó desnatado a 5%, aplicação dos soros dos animais diluídos em PBS -T de 1:50, incubação do anticorpo anti-cabra marcado com peroxidase na diluição de 1:5000 em PBS-T, revelação com a solução substrato/cromógeno (tampão citrato-fosfato 0,05M, contendo 0,04% de ortofenilenodiamina e 30% de peróxido de hidrogênio, com pH 5,0), reação de parada com 25µL/poço de ácido sulfúrico a 5%, e leitura em espectrofotômetro a 492nm. Este diagnóstico apresentou acurácia, sensibilidade e especificidade de 92%, 85% e 90%, respectivamente, quando foi utilizado um ponto de corte de 0,254 para a detecção de LC em caprinos. Trata-se de método e kit para diagnóstico in vitro a ser produzido por empresas farmacêuticas e de imunobiológicos e utilizado na área de medicina veterinária.