SISTEMA DE EXPRESSÃO HETERÓLOGA EM LEVEDURA AUXOTRÓFICA PARA LEUCINA CONTENDO VETOR DE EXPRESSÃO COM MARCA DE SELEÇÃO DEFECTIVA LEU2-D, PROCESSO DE OBTENÇÃO DESSE SISTEMA E USO DE SEQUÊNCIAS REPETIDAS PARA INTEGRAÇÃO MÚLTIPLA

IPC Classification

Abstract

A presente invenção refere-se à construção de vetor de expressão contendo a marca defectiva leu2-d, que permite a seleção de células transformantes contendo um maior número de cópias do vetor integradas no genoma. O escopo da invenção compreende um sistema de expressão contendo conjunto de vetores e linhagem de levedura auxotrófica, e o uso de sequências repetidas do cromossomo II, cromossomo III e rDNA 5S da levedura para promover recombinação homóloga nesses loci no genoma da levedura. A presença dessas sequências repetidas no vetor leva à sua integração múltipla. A linhagem auxotrófica para o aminoácido leucina é obtida após modificações genéticas em células de levedura para interromper o gene LEU2. As células modificadas são utilizadas como hospedeiras para a expressão de genes presentes em vetores contendo a marca de seleção leu2-d. A transformação da linhagem auxotrófica leu2 com os vetores da invenção possibilita a recuperação da prototrofia quando um alto número de cópias do vetor é integrado, expressando, dessa forma, a proteína codificada pelo gene de interesse inserido no vetor.