MÉTODO E KIT BASEADO EM PCR PARA A IDENTIFICAÇÃO DE ANEUPLOIDIAS CROMOSSÔMICAS HUMANAS ESPECÍFICAS

Classificação IPC

Resumo técnico

MÉTODO E KIT BASEADO EM PCR PARA A IDENTIFICAÇÃO DE ANEUPLOIDIAS CROMOSSÔMICAS HUMANAS ESPECÍFICAS . O objetivo da presente invenção é a identificação a nível molecular de possíveis aneuploidias cromossômicas humanas em fetos humanos a partir de mercadores cromossômicos altamente polimórficos, utilizando as técnicas de amplificação simultânea de vários microssatélites pela PCR (PCR multiplex) e análise por DALAC. Uma primeira concretização da presente invenção diz respeito a um método de identificação de aneuploidias cromossômicas em tecidos de fetos abortados espontaneamente ou de natimortos, pela PCR multiplex utilizando iniciadores construídos a partir de marcadores altamente polimórficos correspondentes a microssatélites situados nos diferentes cromossomos mais frequentemente envolvidos em aneuploidias fetais (cromossomos 13, 16, 18, 21, X e Y). Uma segunda concretização da presente invenção diz respeito a um método de identificação da trissomia 21 em células de líquido amniótico colhido por amniocentese no segundo ou terceiro trimestre de gestação pela PCR multiplex utilizando iniciadores construídos a partir de três ou mais marcadores do cromossomo 21 para garantir informatividade e permitir confirmação interna de resultados normais ou anormais. Numa terceira concretização, a invenção é dirigida para a produção de kits diagnósticos que utilizam os processos descritos acima. Um kit básico compreende todos os reagentes necessários para permitir a detecção de aneuploidias cromossômicas usando as técnicas de PCR multiplex que constituem as duas invenções acima, a saber: mistura de iniciadores fluorescentes, nucleotídeos e solução tampão apropriada para a ampliação por PCR. Opcionalmente o kit pode conter a enzima Taq polimerase em quantidades suficientes para amplificação, solução de amostra para preparar o material amplificado para eletroforese, DNA genômico humano como controle, escadas alélicas, e um protocolo e manual para instruir o usuário. As quantidades dos vários reagentes dos kits podem variar de acordo com a aplicação específica.