PRODUÇÃO DO HORMÔNIO DE CRESCIMENTO (GH) DE BOS TAURUS PELA LEVEDURA PICHIA PASTORIS UTILIZANDO UMA SEQÜÊNCIA GÊNICA SINTÉTICA

Classificação IPC

Resumo técnico

PRODUÇÃO DO HORMÔNIO DE CRESCIMENTO (GH) DE BOS TAURUS PELA LEVEDURA PICHIA PASTORIS UTILIZANDO UMA SEQÜÊNCIA GÉNICA SINTÉTICA. O objeto da presente invenção trata da produção do hormônio de crescimento bovino recombinante (rbGH) utilizando como sistema de expressão a levedura P. pastoris. A inovação está focada na utilização de uma sequência gênica sintética que utiliza códons preferenciais e conteúdo otimizado de bases nucleotídicas GC para P. pastoris. O processo de produção do bGH recombinante utilizando como sistema de expressão a levedura P. pastoris compreende: (a) síntese do cDNA codificador do GH bovino (Bos taurus taurus) utilizando como referência as sequências gênicas descritas no GenBank (gi:2168581, gi:2168481, gi:2168363) considerando as seguintes alteraçôes: (1) Adaptação da seqúência sintetizada do referido hormônio para os códons preferenciais da levedura P. pastoris e otimização do conteúdo de bases nucleotídica GO; (II> Inclusão de sítio de restrição Xhol na extremidade 5', e de Xbal, na extremidade 3', com a finalidade de facilitar o processo de clonagem gênica em vetor de expressão; (III) Adição de sequência de nucleotídeos que codifiquem para 6 resíduos de aminoácidos na extremidade 5' imediatamente upstream da seqúência codante do bGH, e adição de um stop codon downstream à sequência; (b) Clonagem do gene sintetizado em vetor de expressão/secreção para P. pastoris (pPICZ A) utilizando metodologias de biologia molecular; (c) Transformação da linhagem de P. pastoris GSII5 para expressão extracelular de bGH; (d) Cultura celular de levedura em frascos aletados de 1 L para expressão do hormônio de crescimento; (e) Avaliação da expressão do hormônio de crescimento através de Western Blotting; (f) Quantificação da eficiência de expressão do hormônio de crescimento recombinante por teste de Bradford e densitometria de gel.