SISTEMA DE ENSAIO IN VITRO DE CLIVAGEM DE PROTEÍNA SPIKE DE SARS-COV-2 BASEADO EM PROTEASE

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Abstract

SISTEMA DE ENSAIO IN VITRO DE CLIVAGEM DE PROTEÍNA SPIKE DE SARS-COV-2 BASEADO EM PROTEASE. Foi relatado que proteases semelhantes à tripsina/tripsina facilitam a entrada do SARS-CoV-2 nas células hospedeiras. Spike possui locais de clivagem de protease entre os domínios S1 e S2. A propriedade de clivagem das proteases pode ser usada para projetar ensaios de triagem de fármacos destinados à triagem de candidatos antivirais contra a clivagem de picos. Na invenção reivindicada desenvolvemos um sistema de ensaio de prova de conceito para triagem de fármacos contra proteases que clivam picos entre S1 e S2. Projetamos uma proteína substrato de fusão contendo uma proteína repórter, o sítio de clivagem da protease entre S1 e S2 e um domínio de ligação à celulose. A proteína substrato pode ser imobilizada na celulose devido à presença do domínio de ligação à celulose (CBD). Quando as proteases clivam o substrato, o CBD permanece ligado à celulose e a proteína repórter é desalojada. O repórter liberado pode ser usado como leitura da atividade de protease.