VETOR PARA EXPRESSÃO DE PROTEÍNA HETERÓLOGA E MÉTODOS PARA EXTRAIR PROTEÍNA RECOMBINANTE E PARA PURIFICAR INSULINA RECOMBINANTE ISOLADA.

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Abstract

VETOR PARA EXPRESSÃO DE PROTEÍNA HETERÓLOGA E MÉTODOS PARA EXTRAIR PROTEÍNA RECOMBINANTE E PARA PURIFICAR INSULINA RECOMBINANTE ISOLADA. A presente invenção refere-se a um vetor para expressão de uma proteina heteróloga por uma bactéria Gram negativa, em que o vetor inclui um ácido nucléico tal como ADN que codifica o seguinte: uma origem de região de replicação; opcional e preferivelmente um marcador de seleção;- um promotor; uma região de iniciação; tal como uma região de iniciação de translação e/ou um sítio de ligação de ribossomo, pelo menos um sítio de restrição para inserção de ácido nucléico heterólogo, por exemplo ADN, codificando a proteína heteróloga, e um terminador de transcrição. O vetor inventivo pode conter ADN que codifica a proteina heteróloga, por exemplo, pró-insulina tal como pró-insulina com rótulo His. Ainda a invenção proporciona um método para extração de uma proteina recombinante de dentro de uma bactéria Gram negativa recombinante tendo uma membrana de célula, sendo lisar a bactéria, bem como um método para purificar uma insulina recombinante humana, em que a pró-insulina recombinante isolada é submetida a sulfitólise, cromatografia de quelação com Ni, restauração, proteólise limitada e separação por cromatografia para prover insulina humana recombinante;- isolada, purificada.