MÉTODO DE PREPARAÇÃO DE DE ANTÍGENO DE TRYPANOSOMA CRUZI E KIT PARA O DIAGNÓSTICO DA DOENÇA DE CHAGAS.

IPC Classification

Abstract

Patente de Invenção "PROCESSO DE PREPARAÇÃO E UTILIZAÇÃO DE ANTÍGENOS DE Trypanosoma Cruzi E ENSAIO PARA O DIAGNÓSTICO DA DOENÇA DE CHAGAS". A i nvenção refere-se a um processo de preparação e utilização de antígenos de Trypanosoma em que um antígeno EpEx é preparado a partir de formas epimastigotas do T cruzi, cepa Tulahuén cujos parasitas foram cultivados a uma temperatura de cerca de 28°C em meio de Schneider para cultura de insetos contendo cerca de 20% de soro fetal bovino e sendo que depois 7-10 dias, os parasitas são coletados do sobrenadante da cultura, lavados 3-5 vezes com tampão fosfatosalina a cerca de 100 mM, a um pH 7,3-7,4 e centrifugados a 12.000-14.000 g por 30-45 minutos, a 4-8°C e os parasitas sendo, então, imediatamente ressuspensos em um tampão Tris-HCl cerca de 10 mM, pH 7,4-7 ,5, contendo cerca de 0,2-0,4 mM de leupeptina, cerca de 2-3 mM de EDTA, cverca de 1% de nonanoil-N-metilglucamida, e submetidos a 4-6 ciclos de congelamento e descongelamento, em nitrogênio líquido e banho-maria (cerca de 37°C), respectivamente, o lisado resultante é centrifugado a 10.000-12.000 g por 5-10 minutos, a cerca de 4-8° C, o sobrenadante, contendo e preparação antigênica EpEx, é removido e armazenado a -70°C até a sua utilização. A invenção se refere também a um ensaio imunoenzimático de quimioluminescência (CL-ELISA) usando os antígenos EpEx e A&T para o diagnóstico da doença de Chagas.