PURIFICAÇÃO DE ANTICORPOS

IPC Classification

Priority claims

Abstract

Patente de Invenção "PURIFICAÇÃO DE ANTI-CORPOS". Em um primeiro aspecto, a presente invenção provê uma proteína de fusão tendo uma afinidade ligante com a interleucina-4 humana, que compreende regiões determinantes de completamentaridade (CDRs) derivadas de um anti-corpo monoclônico neutralizador (MAb) caracterizado por uma constante de dissociação igual ou menor que 2 x 10^ -10^ M para a IL4 humana, e um primeiro componente de fusão no qual pelo menos uma, e preferencialmente todas as regiões determinantes complementares (CDRs) do primeiro componente de fusão são substituídaas pelas CDRs do anti-corpo monoclônicos não humanos (MAb). O anti-corpo monoclônico neutralizador não humano pode ser selecionado do grupo consistindo de 3B9 e 6A1, conforme mais completamente descrito na Descrição Detalahda. Preferencialmente, a proteína de fusão também está operativamente ligada a uma segunda proteína de fusão, que compreende toda ou parte de uma cadeia de imunoglobina constante. Em um aspecto relacionado, a presente invenção provê CDRs derivadas de anti-corpos monoclônicos neutralizadores não humanos (MAb) caracterizados por uma constante de dissociação igual ou inferior a 2x 10^ -10^ M para a IL4 humana, e por moléculas de ácido nucléico codificando tais CDRs. Em um outro aspecto, a invenção provê anti-corpos humanizados tendo pelo memos uma, e preferencialmente seis regiões determinantes (CDRs) derivadas de anti-corpos monoclônicos neutralizadores não-humanos (MAb) caracterizados por uma constante de dissociação igual ou inferior a 2 x 10^ -10^ M para a IL4 humana. Em mais um outro aspecto, um anti-corpo quimérico é provido, contendo regiões constantes de cadeias humanas pesadas e leves, e regiões varáveis de cadeias pesadas e leves derivadas de anti-corpos monoclônicos neutralizadores não humanos (MAb) caracterizados por uma constante de dissociação igual ou inferior a 2 x 10^ -10^ M para IL4 humana. Em mais ou outro aspecto, a presente invenção provê uma composição farmacêutica que contém uma (ou mais) das proteínas de fusão anteriormente descritas ou MAbs (por exemplo, humanizadas, quiméricas, etc.) e um veículo farmaceuticamente aceitável. Em um aspecto adicional, a presente invenção provê um método para o tratamento e/ou prevenção de condições alérgicas em seres humanos através da administração ao referido paciente de uma quantiade eficaz da composição farmacêutica da invenção. Em ainda um outro aspecto, a presente invenção provê métodos, e componentes úteis, para a produção recombinante das proteínas de fusão, dos MAbs (por exemplo, humanizados, quiméricos, etc.), das CDRs dos mesmos, um Fab, ou F(ab)~ 2~, ou elementos análogos dos mesmos, derivados de anti-corpos monoclônicos neurtralizadores não humanos (MAb), caracterizados por uma constante de dissociação igual ou inferior a 2 x 10^ -10^ M para a IL4 humana. Estes componentes incluem sequências isoladas de ácido nucléico codificando os mesmos, plasmídios recombinantes contendo as sequências de ácido nucléicos sob o controle de sequências reguladoras selecionadas, capazes de direcionar a expressão das mesmas em células hospedeiras (preferencialmente de mamíferos) transfectadas com os plasmídios recombinantes. O método de produção envolve a cultura de uma linha de células hospedeiras transfectadas da presente invenção sob condições tais que um anti-corpo, preferencialmente um anti-corpo humanizado seja expresso nas referidas células, e o produto expresso nas mesmas seja isolado. Ainda em outro aspecto da invenção, consta um método para diognosticar alergias e outras condições associados ao excesso de produção de imunoglobina. É em um paciente humano, compreendendo uma amostra de fluido biológico com as proteínas de fusão, MAbs (por exemplo, humanizados, quiméricos, etc.) e Fabs da invenção instantânea, e testes quanto à ocorrência de ligações entre a referida proteína de fusão, o MAb ou Fab e a interleucina-4 humanas. Em um outro aspecto relacionado, é provido um método para monitorar anti-corpos monoclônicos tendo um título mais elevado para a interleucina-4 humana, que compreende: (a) a preparação de um linha de células de hibridomas caracterizada pela secreção de um anti-corpo monoclônico na interleucina-4 humana; e (b) o monitoramento da mencionada linha de célula e hibridomas com interleucina-4 humana conjugada com aldeído, ou com interleucina-4 humana biotinilatada. Também é provido um MAb neutralizador tendo alta afinidade com a IL4, um Fab fragmentado ou um F(ab)~ 2~ fragmentado do mesmo, produzido pelo monitoramento de uma série de produtos hibridomas com interleucina-4 humana conjugada com aldeído ou com IL4 humana biotinilatada.