EXPRESSÃO RECOMBINANTE DE PROTEÍNAS EM UMA FORMA DE DUAS CADEIAS LIGADAS POR DISSULFETO

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Abstract

EXPRESSAO RECOMBINANTE DE PROTEÍNAS EM UMA FORMA DE DUAS CADEIAS LIGADAS POR DISSULFETO. A invenção se relaciona a um método para produzir polipeptideos ou proteínas em uma forma de duas cadeias por expressão recombinante em células hospedeiras de E. coli, em que i) o polipeptideo ou proteína exerce sua atividade biológica como um polipeptideo ou proteína de duas cadeias, ii) o grupo de aminoácido C-terminal da primeira cadeia é um grupo Arg ou Lys, iii) a segunda cadeia da proteina/polipeptideo, em sua extremidade N-terminal, tem 1 até 20 grupos de aminoácidos e uma seqUência pentapeptídica VPXGS referida como PRS, em que X pode ser qualquer aminoácido que ocorre naturalmente, em que V representa Val, Leu, Ile, Ala, Phe, Pro ou Gly, P representa Pro, Leu, Ile, Ala, Phe, Val ou Gly, O representa Gly, Leu, Ile, Ala, Pro, Phe ou Val e 5 representa Ser, Tyr, Trp ou Thr; e (iv) o método compreende as seguintes etapas: a) modificar o polipeptídeo ou proteína no nível de ácido nucléico de tal maneira que o polipeptideo ou proteína na sua forma modificada compreende a seqUência VPXGS em sua área de alça, com X, V, P. O e 5 definidos como acima; b) introduzir a construção modificada no nível de ácido nucléico em células de E. coli; c) cultivo e então lise das células hospedeiras; e d) isolar o polipeptideo ou proteína de duas cadeias. De acordo com uma modalidade preferida da invenção, o polipeptídeo ou proteína é uma neurotoxina botulínica, especialmente a neurotoxina botulínica (BoNT(A)) tipo A.