BIOSSÍNTESE ISENTA DE CÉLULAS DE ÁCIDO NUCLÉICO DE ALTA QUALIDADE E USOS DOS MESMOS

IPC Classification

Priority claims

Abstract

"BIOSSÍNTESE ISENTA DE CÉLULAS DE ÁCIDOS NUCLÉICO DE ALTA QUALIDADE E USOS DOS MESMOS". A invenção proporciona um método aperfeiçoado de amplificação isento de células capaz de produzir grandes quantidades de ácidos nucléicos de qualidade terapêutica e métodos de uso do ácido nucléico sintetizado em pesquisa, produtos terapêuticos e outras aplicações. Os métodos combinam vários diferentes procedimentos do estado da técnica e coordenam suas aplicações a ácidos nucléicos sintéticos de preço acessível para fins terapêuticos. Ele combina amplificação por rolamento de círculo in vitro, polimerases de alta fidelidade, primers de alta afinidade e modelo eficaz especificamente projetado para aplicações em particular. Para fins de expressão, os modelos contêm um cassete de expressão incluem um promotor eucariota, a seqüência de codificação para o gene de interesse e uma seqüência de térmico eucariota. Após amplificação, concatâmeros são subseqüentemente processados de acordo com seu uso pretendido e podem incluir: digestão com enzima de restrição para a produção de cassetes de expressão curtos (SECs); etapas de ligação para circularizar o SEC (CNAs); e/ou etapas de superenrolamento para produzir sCNAs. O produto final contém níveis quase não detectáveis de endotoxina bacteriana.