MÉTODO PARA DETECTAR UMA NUCLEOBASE MODIFICADA EM UMA PLURALIDADE DE ÁCIDOS NUCLEICOS

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Abstract

MÉTODO PARA DETECTAR UMA NUCLEOBASE MODIFICADA EM UMA PLURALIDADE DE ÁCIDOS NUCLEICOS. São descritos métodos de detecção de bases nucleotídicas modificadas em uma amostra de DNA usando glicosilases de DNA específicas para excisar uma nucleobase modificada de interesse. Antes do tratamento com glicosilase, os fragmentos de DNA alvo são copiados por uma DNA polimerase para produzir uma fita de cópia complementar que preserva a informação genética da fita de DNA alvo. Após o tratamento com glicosilase, os fragmentos alvo de DNA são reparados ligando-se através das lacunas para produzir uma deleção em cada posição da nucleobase modificada de interesse ou preenchendo as lacunas com um único nucleotídeo não nativo para produzir uma substituição de base em cada posição da nucleobase modificada de interesse. A comparação das sequências de DNA das duas fitas dos fragmentos alvo permite a identificação das posições da base nucleotídica modificada no fragmento alvo de DNA.