MÉTODO COM BASE EM CÉLULAS PARA DETERMINAR UMA ATIVIDADE DE TOXINA BOTULÍNICA

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Abstract

MÉTODO COM BASE EM CÉLULAS PARA DETERMINAR UMA ATIVIDADE DE TOXINA BOTULÍNICA. A presente invenção se refere a uma célula e um anticorpo para determinar a atividade de toxina botulínica e a um método para determinar a atividade de toxina botulínica com o uso do mesmo. Atualmente, existe a necessidade de desenvolver um ensaio de potência com base em células (CBPA) para substituir o bioensaio LD50 de camundongo (mLD50) no campo de medição da potência de toxina botulínica. A célula e o anticorpo para medir a atividade de toxina botulínica de acordo com a presente invenção são uma célula e um anticorpo para CPBA que devem substituir o mLD50. A linha celular tem um tempo de duplicação significativamente curto em comparação com as células SiMa convencionais que são usadas para determinar a atividade de toxina botulínica e também tem uma sensibilidade significativamente alta à toxina botulínica em comparação com sua linha celular parental. Assim, a linha celular é muito adequada não apenas para a determinação da atividade de toxina botulínica com base em células, mas também para a detecção de toxina botulínica com base em células. Ademais, a linha celular de acordo com a presente invenção pode ser ligada e cultivada de forma estável em uma placa de cultura revestida com poli- d-lisina (PDL) e, portanto, pode ser usado de forma muito eficaz para a determinação da atividade de toxina botulínica com base em células ou para detecção de toxina botulínica com base em células. Também, o anticorpo é um anticorpo monoclonal que tem uma afinidade de ligação e especificidade significativamente altas para SNAP25, supera as limitações do CPBA convencional e torna possível desenvolver um CBPA mais eficaz. Assim, espera-se que o anticorpo seja usado ativamente nos campos farmacêutico e cosmético. Além disso, a presente invenção se refere a um ensaio de potência com base em células ideal (CBPA) que usa células N2-42F e um anticorpo monoclonal que tem uma afinidade de ligação e especificidade significativamente altas para SNAP25, e esse CBPA pode medir a potência de 0,5 U ou menos de toxina botulínica. Espera-se que o CBPA que emprega a célula e o anticorpo da presente invenção se torne um ensaio de potência com base em células altamente confiável e reproduzível para a toxina botulínica.