MÉTODO PARA DETERMINAR UMA SEQUÊNCIA DE AMINOÁCIDOS DE UM POLIPEPTÍDEO DE INTERESSE

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Abstract

MÉTODOS PARA SEQUENCIAÇÃO DE PROTEÍNAS DE NOVO.A presente invenção refere-se a um método para determinar uma sequência de aminoácidos de um polipeptídeo que inclui compreender: colocar uma primeira amostra que contém o polipeptídeo em contato com uma primeira protease (por exemplo, Tripsina) para produzir um primeiro conjunto de fragmentos de peptídeo digeridos; fragmentar o primeiro conjunto de fragmentos de peptídeo digeridos para produzir um primeiro conjunto de íons de peptídeo fragmentados; determinar massas do primeiro conjunto de íons de peptídeo fragmentados; colocar uma segunda amostra que contém o polipeptídeo em contato com uma segunda protease (por exemplo, Tryp-N); fragmentar o segundo conjunto de fragmentos de peptídeo digeridos para produzir um segundo conjunto de íons de peptídeo fragmentados; selecionar pares de íons de peptídeo a partir do primeiro e do segundo conjuntos de íons de peptídeo fragmentados que diferem em massa por uma massa de um resíduo de aminoácido arginina ou um resíduo de aminoácido lisina; atribuir um tipo de íon (seja íon de peptídeo de terminal N ou íon de peptídeo de terminal C) aos pares selecionados dos íons de peptídeo a partir de dois conjuntos de íons de peptídeo fragmentados¿; selecionar uma escada de massa dos íons de peptídeo do mesmo tipo no conjunto de íons de peptídeo fragmentados com massa incremental pela massa de resíduo (ou resíduos) de aminoácido, e montar os resíduos de aminoácido identificados a partir da escada de massa para determinar a sequência de aminoácidos do polipeptídeo de interesse.