MÉTODOS DE AMPLIFICAÇÃO, SISTEMAS E DIAGNÓSTICOS BASEADOS EM SISTEMA EFEITOR CRISPR

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Abstract

São fornecidos aqui métodos e sistemas para amplificar e/ou detectar ácidos nucleicos alvo de fita dupla ou de fita simples. Os métodos compreendem combinar uma amostra compreendendo o ácido nucleico alvo com uma mistura de reação de amplificação, amplificação do ácido nucleico alvo e amplificação adicional do ácido nucleico alvo por abertura, desenrolamento, anelamento e extensão repetidos sob condições isotérmicas. A mistura de reação de amplificação pode incluir um sistema CRISPR de amplificação, uma helicase, um par de iniciadores e uma polimerase. O sistema CRISPR de amplificação pode compreender um primeiro e um segundo complexos CRISPR/Cas, o primeiro e o segundo complexos CRISPR/Cas podem compreender uma primeira enzima CRISPR/Cas e uma primeira molécula guia que guia o primeiro complexo CRISPR/Cas para uma primeira fita do ácido nucleico alvo; o segundo complexo CRISPR/Cas pode compreender uma segunda enzima CRISPR/Cas e uma segunda molécula guia que guia o segundo complexo CRISPR/Cas para uma segunda fita do ácido nucleico alvo.