COMPOSIÇÕES E MÉTODOS PARA MODIFICAÇÃO DE GENOMAS

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Abstract

São fornecidas composições e métodos para modificar sequências de DNA genômico. Os métodos produzem quebras de fita dupla (DSBs) em locais-alvo pré-determinados em uma sequência de DNA genômico, resultando em mutação, inserção e/ou deleção de sequências de DNA no(s) local(is) alvo(s) em um genoma. As composições compreendem construtos de DNA compreendendo sequências nucleotídicas que codificam uma proteína Cms1 operacionalmente ligada a um promotor que é operável nas células de interesse. Os construtos de DNA podem ser usados para direcionar a modificação do DNA genômico em locais genômicos pré-determinados. Os métodos para usar esses construtos de DNA para modificar sequências de DNA genômico são descritos aqui. Além disso, são fornecidas composições e métodos para modular a expressão de genes. As composições compreendem construtos de DNA compreendendo um promotor que é operável nas células de interesse operacionalmente ligadas a sequências nucleotídicas que codificam uma proteína Cms1 mutada com uma capacidade de produzir DSBs abolida, opcionalmente ligada a um domínio que regula a atividade transcricional. Os métodos podem ser usados para regular para cima ou para baixo a expressão de genes em locais genômicos predeterminados.