PLASMÍDEO COM CONJUNTO DE CIRCUITOS CAS9 AUTOLIMITANTES PARA SEGURANÇA REALÇADA (SLICES) E SISTEMA LENTIVIRAL DO MESMO

IPC Classification

Priority claims

Abstract

A presente invenção descreve um Conjunto de Circuitos Cas9 Autolimitantes para Segurança Realçada (SLiCES) que consiste de uma unidade de expressão para o Cas9 de Streptococcus pyogenes (SpCas9), um primeiro sgRNA autoalvejador de Cas9 e um segundo sgRNA alvejando um local genômico escolhido. O circuito autolimitante, pelo controle dos níveis de Cas9, resulta na especificidade de edição de genoma aumentada. Para a sua utilização in vivo, SLiCES foi integrado dentro de um sistema de implementação lentiviral (lentiSLiCES) por intermédio da inibição de circuito para se obter a produção de partícula viral. Após a sua implementação em células alvos, o circuito lentiSLiCES é ligado para editar o local genômico pretendido enquanto simultaneamente intensifica a sua própria neutralização através da inativação de SpCas9. Preservando-se as células alvos da atividade de nuclease residual, o presente sistema hit and go aumenta as margens de segurança para a edição de genoma.