MÉTODOS PARA MODIFICAR GENOMA, MOLÉCULA DE ÁCIDO NUCLEICO, E CÉLULA PROCARIÓTICA MODIFICADA

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Abstract

Composições e métodos para modificar sequências de DNA genômico são fornecidos. Os métodos produzem quebras de cadeia dupla (DSBs) em sítios alvo predeterminados em uma sequência de DNA genômico, resultando em mutação, inserção e/ou eliminação de sequências de DNA no(s) local(ais) alvo em um genoma. As composições compreendem construtos de DNA compreendendo sequências de nucleotídeos que codificam uma proteína Cpf1 ou Csm1 operativamente ligada a um promotor que é operável nas células de interesse. Os construtos de DNA podem ser usados para direcionar a modificação do DNA genômico em locais genômicos pré-determinados. Métodos para usar estes construtos de DNA para modificar sequências de DNA genômico são aqui descritos. Adicionalmente, são fornecidos composições e métodos para modular a expressão de genes. As composições compreendem construtos de DNA compreendendo um promotor que é operável nas células de interesse operacionalmente ligadas a sequências de nucleotídeos que codificam uma proteína Cppl ou Csm1 mutada com uma capacidade abolida de produzir DSBs, opcionalmente ligadas a um domínio que regula a atividade transcricional. Os métodos podem ser usados para regular positivamente ou negativamente a expressão de genes em locais genômicos pré-determinados.