INCORPORAÇÃO DE AMINOÁCIDOS NÃO NATURAIS EM PROTEÍNAS

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Abstract

A presente invenção refere-se a um método para incorporar um aminoácido não natural em uma proteína de interesse em uma célula eucariótica, o referido método compreendendo as etapas de: i) proporcionar uma célula eucariótica que expressa um par de tRNA sintetase ortogonal - tRNA, uma sequência de ácido nucleico de interesse que codifica a referida proteína de interesse e um mutante de eRF1, o referido mutante de eRF1 tendo sequência de aminoácidos tendo pelo menos 60% de identidade de sequência com a sequência de eRF1 do tipo selvagem humano de SEQ ID Nº: 4, a referida sequência de ácido nucleico de interesse compreendendo um códon reconhecido pelo tRNA na posição para incorporação de um aminoácido não natural, ii) incubar a célula eucariótica na presença de um aminoácido não natural a ser incorporado em uma proteína codificada pela sequência de ácido nucleico de interesse, em que o referido aminoácido não natural é um substrato para o tRNA sintetase ortogonal; e iii) incubar a célula eucariótica para permitir a incorporação do referido aminoácido não natural na proteína de interesse através do par de tRNA sintetase ortogonal - tRNA. A invenção também se refere a usos, células hospedeiras, combinações e kits.