MÉTODO PARA IDENTIFICAR UM POLIPEPTÍDEO TENDO UMA FUNCIONALIDADE OU ESPECIFICIDADE DE LIGAÇÃO DESEJADAS, BIBLIOTECA DE MOLÉCULAS DE POLINUCLEOTÍDEO, MÉTODO PARA GERAR UMA BIBLIOTECA DE POLINUCLEOTÍDEOS E MÉTODO PARA GERAR UMA POPULAÇÃO DE CÉLULAS HOSPEDEIRAS

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Abstract

MÉTODO PARA IDENTIFICAR UM POLIPEPTÍDEO TENDO UMA FUNCIONALIDADE OU ESPECIFICIDADE DE LIGAÇÃO DESEJADAS, BIBLIOTECA DE MOLÉCULAS DE POLINUCLEOTÍDEO, MÉTODO PARA GERAR UMA BIBLIOTECA DE POLINUCLEOTÍDEOS, VETOR, CÉLULA HOSPEDEIRA, ANTICORPO E MÉTODO PARA GERAR UMA POPULAÇÃO DE CÉLULAS HOSPEDEIRAS. A presente invenção refere-se a um método que oferece eficiência, flexibilidade, utilidade e velocidade incomparáveis para a descoberta e otimização de polipeptídeos com funcionalidade e/ou especificidade de ligação desejadas, incluindo moléculas de ligação a antígeno, tais como anticorpos e fragmentos dos mesmos, para fenótipos funcionais e/ou de ligação desejados. O novo método baseia-se em construções de transposição e bibliotecas de ADN diversificadas clonadas em vetores de transposição e em sua transfeção em células hospedeiras por expressão transitória concomitante de uma enzima transponase funcional. Isto assegura uma introdução eficiente e estável de vetores de expressão baseados na transposição de células hospedeiras de vertebrados em uma etapa, que podem depois ser classificados em relação a um fenótipo funcional ou de ligação desejado das proteínas expressas, após o que as sequências codificantes relevantes para as proteínas expressas, incluindo anticorpos e fragmentos dos mesmos, podem ser identificadas por técnicas de clonagem e de sequenciação de ADN convencionais.