GENE, CASSETE DE ANCORAGEM DO ARS-R, CASSETE DE EXPRESSÃO-ANCORAGEM DO ARS-R, PLASMÍDEO RECOMBINANTE, LINHAGEM TRANSGÊNICA BACTERIANA, USO DO DITO GENE, USO DA DITA LINHAGEM EM PROCESSOS DE BIORREMEDIAÇÃO AMBIENTAL

IPC Classification

Priority claims

Abstract

GENE, CASSETE DE ANCORAGEM DO ARS-R, CASSETE DE EXPRESSÃO-ANCORAGEM DO ARS-R, PLASMIDEO RECOMBINANTE, LINHAGEM TRANSGÃNICA BACTERIANA, USO DO DITO GENE, USO DA DITA LINHAGEM EM PROCESSOS DE BIORREMEDIAÃÃO AMBIENTAL. A presente invenção refere-se à construção e inserção de um vetor plasmidial de DNA, de amplo espectro para bactérias Gram-negativas, portador de uma sequência gênica que, ao ser expressa, permite a ancoragem de uma proteína quelante de íons de arsênio na superfície celular de bactérias Gram- negativas. Para tanto, a sequência estrutural do gene regulatório arsR sem o códon de terminação (SEQ. ID Nº1) foi amplificada por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), utilizando como molde o cromossomo 1 de Cupriavidus metallidurans, linhagem CH34 e inserida no vetor de clonagem pGEM-T, originando o plasmídeo pGEMT-As (SEQ. ID Nº 2). O vetor de expressão, contendo a sequência que codifica o cassete para a expressão e ancoragem de proteínas heterólogas em bactérias Gram-negativas, sob o controle do promotor pan (SEQ. ID Nº 3), foi obtido por meio da digestão do plasmídeo pCM-Hg com as enzimas de restrição Xbal e Sall. O gene arsR foi liberado do plasmídeo pGEMT-As por digestão com as enzimas de restrição Xbal e Sall e então ligado ao vetor de expressão pCM linearizado (SEQ. ID Nº4), resultando na construção do plasmídeo pCM-As (SEQ. ID Nº 5). Adicionalmente, a presente invenção provê cepas recombinantes de bactérias Gram-negativas contendo o dito plasmídeo recombinante, método de obtenção, uso do plasmídeo recombinante para aumentar a resistência das bactérias ao arsênio e também aumentar a sua capacidade de adsorver íons de arsênio, além da utilização das cepas transgênicas para a adsorção de íons de arsênio em processos de biorremediação ambiental, com possibilidade de recuperar o metalóide como subproduto.