Método para selecionar uma célula recombinante de mamífero transfectada estável, método para produzir um anticorpo e vetor de expressão

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Abstract

MÃTODO PARA SELECIONAR UMA CÃLULA RECOMBINANTE DE MAMÃFERO TRANSFECTADA ESTÃVEL, MÃTODO PÃRA PRODUZIR UM ANTICORPO E VETOR DE EXPRESSÃO.No presente pedido é relatado que para as transfecções temporárias o uso do promotor do fator de alongamento humano 1 alfa (com íntron A) fornece uma produtividade aumentada (na organização LC-HC-SM), o uso da sequência sinal poliA do hormônio de crescimento bovino fornece uma produtividade aumentada em comparação ao uso da sequência sinal poliA de SV40, a adição de HGT à sequência sinal poliA de bGH resulta em uma produtividade aumentada em vetores contendo o promotor de hCMV e a organização do vetor LC(3'-5)-HC-SM resulta em expressão melhorada. Para pools estáveis é relatado que pools gerados com vetores contendo o promotor de hEf1(ALFA) mostraram uma produtividade melhorada em análise de batelada, clones gerados com vetores contendo o promotor de hEF1(ALFA) mostraram um número reduzido de clones com baixa produção, e clones gerados com vetores contendo o promotor de hEF1(ALFA) mostraram uma estabilidade mais alta de expressão de IgG. Para clones únicos é relatado que a organização do vetor com a posição a jusante de marcador de seleção (LC-HC-SM) tem um efeito positivo na produtividade de clones únicos e que clones gerados com vetores contendo a sequência sinal poliA de bGH e de hGT tiveram produtividades mais altas.