MÉTODO PARA ALTA EXPRESSÃO DE PROTEÍNA RECOMBINANTE DE BACTÉRIAS MODIFICADAS GENETICAMENTE E USO DO MESMO

IPC Classification

Priority claims

Abstract

AbstractProvided are methods for highly expressing recombinant protein of engineering bacteria and the use thereof. The method comprises the following steps: (1) engineering bacteria of Escherichia coli with pET system are transfected with recombinant mutated plasmid to obtain positive monoclonal colonies; (2) the positive monoclonal colonies are enriched to obtain a seed bacteria solution, and the seed bacteria solution is induced to enrichment and growth in a large amount; and (3) the bacteria supernatant containing the recombinant protein as the expression target is separated, and then the recombinant protein in the bacteria supernatant is extracted and purified. The method is characterized in that the engineering bacteria of Escherichia coli with pET system are E. coli B834 (DE3). The components of the mass enrichment medium and the protein purification steps are also optimized such that a significant improvement in the yield and purity of the protein is achieved and the method is suitable for applying to the large-scale production of recombinant protein expressed by the engineering bacteria of Escherichia coliTRADUÇÃO DO RESUMORESUMOPatente de Invenção: "MÉTODO PARA ALTA EXPRESSÃO DE PROTEÍNA RECOMBINANTE DE BACTÉRIAS MODIFICADAS GENETICAMENTE E USO DO MESMO".A invenção oferece métodos para alta expressão de proteína recombinante de bactérias modificadas geneticamente e o uso do mesmo. O método compreende as seguintes etapas: (1) bactérias de Escherichia modificadas geneticamente coli com o sistema pET são transfectadas com plasmídios mutados recombinantes para obter colônias monoclonais positivas; (2) as colônias monoclonais positivas são enriquecidas para obter uma solução de bactéria semente, e a solução de bactéria semente é induzida ao crescimento e crescimento em uma grande quantidade; e (3) o sobrenadante de bactéria contendo a proteína recombinante como o alvo de expressão é separado, e então a proteína recombinante no sobrenadante de bactéria é extraída e purificada. O método caracteriza-se pelo fato que as bactérias de Escherichia modificadas geneticamente coli com o sistema pET são E. coli B834 (DE3). Os componentes do meio de enriquecimento em massa e as etapas de purificação da proteína também são otimizados de modo um aumento significativo no rendimento e na pureza da proteína é obtido e o método é adequado para ser aplicado à produção em grande escala de proteínas recombinantes expressas pelas bactérias de Escherichia modificadas geneticamente coli.