PROTEÍNA QUIMÉRICA DOS ALPHAHERPESVIRUS BOVINOS 1 E 5 PARA VACINAÇÃO E DIAGNÓSTICO

IPC Classification

Abstract

PROTEÍNA QUIMÉRICA DOS ALPHAHERPESVIRUS BOVINOS 1 E 5 PARA VACINAÇÃO E DIAGNÓSTICO. A presente invenção diz respeito ao desenvolvimento e utilização do produto da expressão da proteína quimérica SEQ ID Nº 1, constituída a partir da junção de epítopos imunodominantes das glicoproteínas B, C e D dos Alphaherpesvirus bovinos 1 e 5. Inicialmente foi realizada a recuperação das sequencias das glicoproteínas dos organismos de interesse para posterior predição de epítopos reconhecidos por linfócitos B, células T citotóxicas e células T helper. Posteriormente à análise de antigenicidade, a quimera foi montada utilizando os ligantes GGGGS e EAAAK. Após, a análise de parâmetros físico-químicos foi realizada, seguida de uma nova análise de antigenicidade. A modelagem e o docking molecular foram realizados com o modelo do receptor TLR. Para a expressão da SEQ ID Nº 1, o vetor pET24a contendo o gene de interesse foi utilizado para transformar a cepa de E. coli BL21 (DE3) Star por choque térmico. Em seguida a amostra foi processada e em sequência purificada por cromatografia de afinidade, para posterior diálise e quantificação por BCA. A caracterização foi realizada por Western blotting e a antigenicidade por teste de ELISA indireto com protocolo in house. A SEQ ID Nº 1 apresenta 308 aminoácidos, peso molecular de 31.48 kDa, pI teórico de 9.94, estimativa de meia vida em E. coli de >10 horas, GRAVY de -0,457, antigenicidade de 1.1543 e se caracteriza como instável e sem potencial alergênico. As frações solúvel e insolúvel da SEQ ID Nº 1 foram reconhecidas pelo anti-HIS6x em um Western blotting, caracterizando-a pelo seu peso molecular de ~31 kDa. A SEQ ID Nº 1 foi fortemente reconhecida pelos anticorpos IgG-anti-alphaherpesvirus dos soros bovinos, demonstrando sua antigenicidade. A SEQ ID Nº 1 demonstrou poder ser utilizada para testes diagnósticos e/ou estudos epidemiológicos e em vacinas contra os Alphaherpesvirus bovinos 1 e 5.