PROTEASE HÍBRIDA RECOMBINANTE, SEQUÊNCIA NUCLEOTÍDICA DE DNA DA REFERIDA PROTEASE HÍBRIDA RECOMBINANTE, PROCESSO DE OBTENÇÃO DA REFERIDA PROTEASE HÍBRIDA RECOMBINANTE E SEU USO

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Abstract

PROTEASE HÍBRIDA RECOMBINANTE, SEQUÊNCIA NUCLEOTÍDICA DE DNA DA REFERIDA PROTEASE HÍBRIDA RECOMBINANTE, PROCESSO DE OBTENÇÃO DA REFERIDA PROTEASE HÍBRIDA RECOMBINANTE E SEU USO. A presente invenção se refere a uma protease híbrida recombinante que compreende a fusão da protease do vírus etch do tabaco (TEV) com o sítio catalítico da protease ULP1 unidas por um ligante flexível. Adicionalmente, a presente invenção se refere a sequência nucleotídica de DNA da referida protease híbrida recombinante. Além disso, a presente invenção se refere a um processo de obtenção da dita protease híbrida recombinante, o qual compreende as etapas de: (a) construir a sequência de DNA nucleotídica da protease híbrida recombinante da presente invenção; (b) otimizar os códons para expressão em levedura; (c) clonar a sequência obtida na etapa b em um vetor bacteriano; (d) realizar a expressão da protease híbrida em bactéria E. coli quimicamente competente; (e) purificar a protease híbrida após expressão por cromatografia de afinidade; e (f) realizar a diálise da protease híbrida em tampão de diálise (50mM de Tris-HCl, pH 8,0; 0,2% Igepal; 300mM NaCl, 1mM DTT) para obtê-la na forma solúvel. Por fim, a presente invenção se refere ainda ao uso da dita protease híbrida para remover proteínas de fusão de diferentes proteínas de interesse, seja para uso em pesquisa ou clínico.