OLIGONUCLEOTÍDEOS INICIADORES E PROCESSO DE DETECÇÃO POR HIGH RESOLUTION MELTING DOS FUNGOS FUSARIUM GUTTIFORME E FUSARIUM ANANATUM PATOGÊNICOS EM ABACAXI

IPC Classification

Abstract

OLIGONUCLEOTÍDEOS INICIADORES E PROCESSO DE DETECÇÃO POR HIGH RESOLUTION MELTING DOS FUNGOS FUSARIUM GUTTIFORME E FUSARIUM ANANATUM PATOGÊNICOS EM ABACAXI. Trata-se de um conjunto de reaçõs da cadeia polimerase quantitativo (qPCR) seguido por reações de High Resolution Melting (HRM), identificando variações genéticas em sequências de DNA com base em seus perfis de temperatura de melting a partir do uso de um corante fluorescente, homogeneamente intercalado no DNA de cadeia dupla e de novos oligonucleotídeos iniciadores desenvolvidos especificamente para a detecção e diferenciação Fusarium guttiforme e Fusarium ananatum, patógenos no abacaxi. Tal método de detecção ocorre a partir da amplificação de um novo fragmento de DNA utilizando os oligonucleotídeosiniciadores desenvolvidos, o qual apresentará caracteristicas de melting especificas para cada espécie analisada. Este método de detecção tem como principal características o pouco tempo necessário para sua realização, cerca de 1 hora e 30 minutos, e a possibilidade de realizar tanto a genotipagem como a determinação dapresença de SNPs em uma única plataforma, o que não foi observado em nenhum outro método. Além disso, ressalta-se que o uso da técnica de HRM é sensível ebarata, onde seu custo estimado para uma reação é de, aproximadamente, U$ 1,50 e com risco de contaminação significativamente reduzida em comparação com outrosprocedimentos, como RFLP ou nested PCR, uma vez que todo processo é concluído em um único tubo fechado.