TRANSFORMAÇÃO GENÉTICA DE CÉLULAS HAPLOIDES DE MILHO, VIA COLONIZAÇÃO AGROBACTERIANA DOS TECIDOS FLORAIS, UTILIZANDO-SE UM MEIO DE INOCULAÇÃO OTIMIZADO

IPC Classification

Abstract

TRANSFORMAÇÃO GENÉTICA DE CÉLULAS HAPLOIDES DE MILHO, VIA COLONIZAÇÃO AGROBACTERIANA DOS TECIDOS FLORAIS, UTILIZANDO-SE UM MEIO DE INOCULAÇÃO OTIMIZADO. O milho é uma cultura altamente dependente do melhoramento genético assistido pela biotecnologia, com 93% da sua área cultivada sendo composta por plantas transgênicas. Contudo, algumas etapas inerentes ao processo de concepção dos materiais de milho geneticamente modificados são bastante complicadas, sobretudo aquelas que envolvem a transformação genética da planta. Devido às dificuldades inerentes à cultura in vitro de embriões (técnica padrão para a transformação de monocotiledôneas em geral), desenvolvemos uma metodologia adaptada de floral dip e floral drenching, a fim de simplificar o processo, permitindo que indivíduos transgênicos de milho possam ser obtidos de maneira mais rápida e eficiente. Tal metodologia pode ser utilizada, inclusive, para a obtenção de mutantes via tecnologias de edição gênica. Para tanto, utilizamos, no meio de inoculação agrobacteriana, uma mistura de reagentes, que inclui, entre outros compostos: um sistema multienzimático capaz de degradar parcialmente determinados metabólitos primários presentes na parede celular vegetal, quebrando importantes barreiras histológicas e, por conseguinte, tornando as células mais permeáveis à Agrobacterium; e um inibidor dos efeitos deletérios do etileno, um fitohormônio produzido em decorrência do estresse causado por aquele microrganismo. A correta condução do ambiente físico-químico (antes, durante e depois da inoculação propriamente dita) também é fundamental para a efetiva colonização agrobacteriana dos tecidos florais (em particular, das células haploides ali presentes), de modo que essa não incorra nos malefícios típicos dos processos infecciosos. Nosso conceito inventivo resulta em percentuais significativamente mais elevados de transformação genética (em comparação aos protocolos que configuravam o estado atual da técnica), fazendo com que essa nova metodologia in planta seja bastante vantajosa e promissora para o futuro do melhoramento de milho.