MÉTODO E KIT PARA DIAGNÓSTICO DA LINFADENITE CASEOSA EM CAPRINOS, UTILIZANDO O ANTÍGENO RCP01850

IPC Classification

Abstract

MÉTODO E KIT PARA DIAGNÓSTICO DA LINFADENITE CASEOSA EM CAPRINOS, UTILIZANDO O ANTÍGENO RCP01850. O presente invento trata-se de um método e kit para diagnóstico sorológico baseando-se em ELISA indireto para linfadenite caseosa em caprinos, que utiliza a proteína recombinante CP01850 de C. pseudotuberculosis como antígeno para detectar a presença de anticorpos anti-C. pseudotuberculosis no soro dos animais. Este diagnóstico consiste na aplicação das seguintes etapas: sensibilização de placa de 96 poços com o antígeno rCP01850 na concentração de 2microgramas/mL, seguido de bloqueio utilizando PBST mais leite em pó desnatado a 5%, aplicação dos soros dos animais diluído em PBS-T de 1:50, incubação do anticorpo anti-cabra marcado com peroxidase na diluição de 1:5000 em PBS-T, revelação com a solução substrato/cromógeno (tampão citrato-fosfato 0,05M, contendo 0.04% de ortofenilenodiamina e 30% de peróxido de hidrogênio, com pH 5,0), reação por meio de reação de parada com 25microlitros/poço de ácido sulfúrico a 5% e leitura em espectrofotômetro a 492nm. Este diagnóstico apresentou acurácia, sensibilidade e especificidade de 99,7, 94,3 e 100%, respectivamente, quando foi utilizado um ponto de corte de 0,10425 para a detecção da LC em caprinos. Deste modo, solicita-se a proteção deste método e kit para diagnóstico in vitro usando a proteína rCP01850 como antígeno com o objetivo de detectar a linfadenite caseosa em caprinos.