DESENVOLVIMENTO DE DUPLEX-QPCR PARA DETECÇÃO SIMULTÂNEA DAS BACTÉRIAS XANTHOMONAS ALBILINEANS E LEIFSONIA XYLI SUBSP. XYLI QUE ATACAM EM CANA-DE- AÇÚCAR

IPC Classification

Abstract

DESENVOLVIMENTO DE DUPLEX-qPCR PARA DETECÇÃO SIMULTÂNEA DAS BACTÉRIAS Xanthomonas albilineans E Leifsonia xyli subsp. xyli QUE ATACAM EM CANA-DE-AÇÚCAR. A presente invenção conjuga as funções de detectar simultaneamente ou separadamente a presença das bactérias Xanthomonas albilineans e/ou Leifsonia xyli subsp. xyli, e um controle endógeno por meio de PCR em tempo real (qPCR) pelo sistema TaqMan® (Xa-Lxx-qPCR). O produto gerado nessa invenção são dois pares de oligonucleotídeos para qPCR e duas sondas específicos para região única do DNA de duas distintas espécies de bactérias que causam as doenças conhecidas como Escaldadura das folhas e Raquitismo das soqueiras, respectivamente, na cultura da cana-de-açúcar. Para controle interno da reação foi desenhado mais um par deoligonucleotídeo e uma sonda especifica para anelar na enzima Rubisco presente abundantemente em qualquer tipo de material vegetal. Assim, a detecção ocorre por meio dos oligonucleotídeos e sondas específicas, que foram desenhadas especialmente para multiplexagem da PCR em tempo real, com intuito que não haja sobreposição e nem competição entre os alvos. A utilização dos produtos deste invento em laboratório de diagnóstico, proporcionará diagnósticos mais sensíveis e altamente específicos,melhorando a eficiência das técnicas já existentes e com a vantagem da redução de custo da reação de PCR em tempo real, já que a detecção acontecerá para dois alvos ao mesmo tempo, tornando o uso de qPCR mais rotineiramente factível a detecção em larga escala.