MÉTODO PARA A PRODUÇÃO DE UMA COMPOSIÇÃO DE PROTEÍNAS DE MATRIZ EXTRACELULAR

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Abstract

MÉTODO PARA A PRODUÇÃO DE UMA COMPOSIÇÃO DE PROTEÍNAS DE MATRIZ EXTRACELULAR. O presente objeto possui aplicação na área de biotecnologia e saúde, mais especificamente nos segmentos farmacêuticos, cosméticos, estéticos e engenharia tecidual. O método para a produção de uma composição de proteínas de matriz extracelular compreende as etapas: Etapa 1: cultivo celular 2D de células humanas em meio de cultura que compreende antibióticos, ambiente umidificado de ar atmosférico; Etapa 2: formulação da biotinta compreendendo 20 a 25 % em massa copolímero de bloco; e 10 a 20% de peptídeos; além de moléculas indutoras de expressão de colágenos (I, II, III e IV); Etapa 3: bioimpressão do construto 3D com várias camadas, em formato cilíndrico e porosidade de 30 a 60%; Etapa 4: homogeneização dos construtos 3D em solução ácida em rotação de 200 a 500 rpm por 30 a 40 minutos, a temperatura entre 4 e 14 ºC; Etapa 5: processo de separação celular através de filtração sendo que os filtrados são lavados 3 a 5 vezes retornando para a etapa 2 e as soluções proteicas são levadas para centrifugação, sendo este processo repetido de 10 a 20 vezes, com uma taxa de fluxo de entrada de 50 a 100 ml/min, mantendo a força de cisalhamento da corrente de alimentação abaixo de 2.000 s-1; Etapa 6: a solução proteica obtida na etapa anterior ou 5 sofre lavagens para concentração repetidas de 2 a 4 vezes em centrifugação refrigerada de 4 a 10 ºC, até obter-se o concentrado de proteínas estruturais final apresentando 30 a 150 mg/ml.